Se estudió un total de 21 clones de Cynara scolymus cultivados en el INTA SAN PEDRO en forma experimental para la producción de alcauciles. Se colectaron en otoño las hojas basales, las que fueron extraídas con agua caliente por un procedimiento similar al industrial. El extracto fue analizado por espectrometría y por cromatografía líquida (HPLC).

Se determinó el contenido en orto difenoles totales ("cinarina bruta") y en cinarina (ácido 1,5-dicafeoilquínico). Los primeros oscilaron entre 1,82 y 4,75 g por kg de hoja fresca. La cinarina, analizada en 15 clones, osciló entre 0,05 g y 1,15 g por kg de hoja fresca.

SUMMARY

A total of 21 clons of the stated species were studied. They had been cultivated experimentally in INTA SAN PEDRO for the production of artichokes. The basal leaves were collected in automn and extracted with water using a procedure similar to the industrial one. The extract was analiyzed by spectrophotometry (total content of o-diphenols) and by HPLC (cynarin or 1,5-dicaffeoylquinic acid). The o-diphenol content was between 1,82 g and 4,75 g per kg of fresh leaves. Cynarin was quantitated in 15 clons and was between 0,05 g and 1,15 g per kg of fresh leaves.

INTRODUCCIÓN

La alcachofa (Cynara scolymus L.) es utilizada por el hombre desde tiempos inmemoriales. Además de consumirse sus capítulos como alimento se utilizaron y utilizan sus hojas como medicamento. Desde hace siglos se preparan diversos tipos de extractos o tinturas de las mismas, que se prescriben para el tratamiento de los desórdenes hepáticos. En los últimos decenios se han estudiado los extractos polares y se demostró tanto la actividad colerética y colagoga de los mismos como su acción hepatoprotectora, que en su momento se asoció con la presencia de derivados del orto-difenol denominados genéricamente "cinarina" y valorados en los extractos por diversas reacciones colorimétricas. Recientemente, y gracias al desarrollo de la cromatografía líquida de alta resolución, se pudieron estudiar individualmente algunos de los componentes de dichos extractos. Ello llevó a la demostración de que la actividad se debe a la presencia de isómeros del ácido 1,5-dicafeoilquínico, que aparentememe es un artificio producido por la isomerización de los otros durante el proceso de extracción. Los trabajos recientes se hallan orientados al estudio de la influencia de los métodos de extracción sobre el contenido final en ácidos dicafeilquínicos y al ensayos farmacológico de cada uno de ellos (IGLESIAS et al., LAGUNA et al.).

En nuestro país la alcachofa se ha cultivado tradicionalmente como planta hortícola en los alrededores de La Plata (AVILA) y como planta medicinal en la zona de Mercedes, Provincia de Buenos Aires.

Recientemente se concretó un convenio entre el Laboratorio Roux-Ocefa, tradicional elaborador de extracto de alcachofa y el INTA SAN PEDRO, que se hallaba efectuando ensayos de horticultura con diversos clones de Cynara scolymus. Estos habían sido seleccionados y desarrollados para la producción de alcauciles y surgió el interés de determinar si las variaciones morfológicas que habían permitido la selección estaban acompañadas de diferencias en el contenido en cinarina.

PARTE EXPERIMENTAL

El material (hojas basales) fue colectado en el INTA SAN PEDRO el 14 de abril de 1987. Se trataba de 21 diferentes clones de Cynara scolymus que fueron analizados individualmente previa extracción con agua a ebullición del material vegetal y posterior valoración por el método de LONGO de la cinarina bruta. Una parte del extracto acuoso de cada lote fue liofilizada. El residuo seco fue tratado con metanol y la solución metanólica valorada por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) utilizando el método de IGLESIAS et al, con el objeto de determinar el ácido 1,5-dicafeoilquínico (cinarina).

RESULTADOS

En la tabla 1 se muestran los valores individuales obtenidos aplicando a un mismo material vegetal el método de LONGO de valoración de derivados orto difenólicos (cinarina bruta).

La tabla 2 muestra el rendimiento de cada clon en extracto acuoso y el contenido de dicho extracto en cinarina bruta y pura.

La tabla 3 muestra el contenido calculado por kg de hoja fresca y la tabla 4 lo representa por kg de hoja desecada.

DISCUSIÓN

Ante todo es necesario señalar que en las determinaciones efectuadas se siguió un procedimiento que, aunque no sea representativo de los productos existentes genuinamente en el material vegetal, acerca lo más posible al producto deseado, que debe ser rico en ácido 1,5-dicafeilquínico. Por ello, siguiendo las experiencias de IGLESIAS et al. se trabajó con extractos acuosos.

En la valoración de principios activos presentes en un mismo lote de material vegetal influyen no sólo las variaciones que naturalmente se producen entre individuos del mismo clon sino también aquellas introducidas por la metodología aplicada. Por dicha razón se tomó como representativo un lote conformado con material de un único clon del que se conformaron 7 muestras, que fueron procesadas y valoradas individualmente para tener una idea de la dispersión de valores esperable como consecuencia del proceso extractivo y de los pasos subsiguientes del procedimiento analítico.

Se calculó una desviación estándar del orden del 10 p. 100, lo que indica que la metodología es aceptable, tratándose de un procedimiento aplicado a material vegetal en el que se halla involucrado tanto la dispersión producida por el proceso extractivo cuanto la que produjeron las diversas operaciones posteriores.

Como la valoración dei contenido en "cinarina bruta" de los diferentes extractos se efectuó tradicionalmente en este Laboratorio utilizando el método de nitrosación de Hoepfner adaptado por LONGO, se optó por seguir utilizando el método tradicional, que permitiría comparar los distintos resultados entre sí. Sin embargo, debe advertirse que, al tratarse de un método aplicable a cualquier derivado dicafeoilquinico, los resultados obtenidos representan por lo menos la sumatoria de todos los isómeros, calculados como cinarina.

Como por otra parte está demostrado que el principal responsable de la actividad de los extractos de alcachofa es el ácido 1,5-dicafeoilquínico, los extractos acuosos, luego de liofilizados, fueron evaluados por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) con el objeto de valorar este componente.

Tomando en cuenta la hoja fresca, se observa que el rendimiento en cinarina bruta de los diferentes clones (tabla 3) es bastante uniforme y va del 1,82 al 4,75 p. 1000. En cuantc al ácido 1,5-dicafeoilquínico, su concentración va del 0,10 al 1,15 p. 1000, siempre en hoja fresca. Sin embargc, los resultados más espectaculares se hallan al observar el rendimiento relativo (tabla 4) de ácido 1,5-dicafeoilquínico con respecto a la cinarina bruta. Allí se observan variaciones que van del 2,6 al 24,2 por ciento.

Las conclusiones de este estudio preliminar permiten afirmar que la selección clónica de Cynara scolymus puede llevar a ejemplares con mayor rendimiento de cinarina bruta, dentro de una magnitud media del 3 p. 100 del material desecado. Sin embargo la mejor aplicación de esta selección podría conducir a lograr un aumento de la concentración de ácido 1,5-dicafeoilquínico con respecto a la cinarina bruta, ya que de una concentración media cercana al 5 p. 100 podría pasarse (clon 16) al 24 p. 100 con el consiguiente aumento de la actividad farmacológica.

En cuanto a referencias a análisis de especies cultivadas en la Argentina, la única hallable fue la de VIGLIOLA & LIVRAGHI, que analizaron cultivares desarrollados por el Ing. Avila en la Universidad de La Plata, que valoraron ortodifenoles totales y obtuvieron valores que van del 0,75 a 1,83 g por 100 g de material vegetal desecado, los que no son compatibles con nuestros resultados. Es evidente que la metodología (que no describen) empleada por los autores da valores intermedios entre los de ácido 1,5-dicafeoilquínico (HPLC) y los de la "cinarina bruta" según el método de Hoepfner-Longo.

AGRADECIMIENTOS

Las muestras analizadas fueron provistas por el INTA SAN PEDRO mediante un convenio entre el mismo y el Laboratorio Roux-Ocefa. Se agradece al Ing. José Pablo Rodríguez Coordinador Nacional del Programa de Hortalizas del INTA por su colaboración en la elaboración y ejecución de dicho convenio. Se agradece a la Prof. Dra. Virginia Martino, de la Cátedra de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad de Buenos Aires, la provisión de una muestra auténtica de ácido 1,5-dicafeoilquínico.