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JORNADAS NACIONALES DE ACTUALIZACIÓN SOBRE RECURSOS AROMÁTICOS Y MEDICINALES
Volumen IX - NECOCHEA, 1984 - pág 241 a 243.

MICROPROPAGACION "IN VITRO" DE Stevia rebaudiana BERTONI POR MEDIO DE SEGMENTOS NODALES Y MERISTEMAS
Manuel C. MARCAVILLACA *

* Ingeniero Agrónomo, integrante de la Unidad Fisiología Vegetal del Departamento de Botánica, INTA- Castelar, provincia de Buenos Aires.

SUMMARY

Nodes from 0.5 to 1 mm long and meristems from 0.2 to O.5 mm long of Stevia rebaudiana Bertoni were aseptically cultivated in a nutritive media of agar similar to that of Miller, C.O. 1961, benciladenine (0.1-1-2 and 5 mg/l) and naftaleneacetic acid (0.1-1-2 and 5 mg/l) were added. The explants of nodes and meristems were pot in testing tubes of flat end with 10 ml of media. They were kept in a growth chamber at 25 C 1 C with a photoperiod of 16 hours and with a light intensity of 200 foot candles.

The nodes treated with benciladenine (5 mg/l) produced 5 or 6 buds per explant after 10 days of being planted. The buds rooted when transfered to the same media with naftaleneacetic acid (2 mg /l). The meristems produced abundant white callus in the majority of the hormonals treatments; only in some cases small buds weve pro duced in the presence of benciladenine (2 mg/).




La yerba dulce (Stevia rebaudiana Bertoni) , es una especie de la familia botánica de las Compuestas; tribu Asteraceae; habita naturalmente en Paraguay, sudeste de Brasil y noreste de Argentina (provincia de Misiones). Se considera la principal productora de un importante glucósido, llamado "Steviósido", cuyo poder edulcorante es de 300 veces más que el de la sacarosa. (Galperin de Levy, R.H., 1982 y Kirchheimer, M.J., 1981).

El Steviósido tiene múltiples usos y aplicaciones en diversas industrias como en la elaboración de gaseosas, caramelos,chiclets, dentífricos, helados, postres, salsas,pídeles, etc., y los residuos de la fabricación se agregan a los alimentos balanceados para el uso animal.

En farmacología, se emplea contra la presión alta, como antiparasitario; diabetis,obesidad, entre otros. También posee actividad giberelínica en el crecimiento de las plantas. La multiplicación de esta valiosa especie es por semillas o matas; pero no sólo presentan problemas de heterogeneidad; sino que las semillas pertenecen al grupo de las microblásticas (breve período de poder germinativo), además requieren cuidados especiales en el almacigo, cuyo crecimiento es muy lento. Esto hace inaplicable, cuando se trata de la multiplicación masiva de plantas seleccionadas.

Se realizaron estudios preliminares de la micropropagación "in-vitro", a partir de segmentos nodales y meristemas. Tallos en crecimiento de una planta de procedencia de la provincia de Misiones, cultivada en invernáculo, se cortaron y se desinfectaron con alcohol al 96 %, durante dos segundos; luego se colocaron por 10 minutos, en una solución de hipoclorito de Ca (50 g/1) a la que se agre eó gotas de detergente, agitándose repetidas veces el recipiente de desinfección, con el objeto de facilitar el acceso del desinfectante a todo el material; concluido el tiempo se enjuagó con sucesivos cambios de agua destilada estéril.

Explantos (porción de tejido u órgano de una planta donante, sembrado asépticamente en un medio nutritivo estéril) de nudos (0,5 a 1 mm) y de meristemas (de 0,2 a 0,5 mm de longitud), se diseccionaron en una cámara esterilizada, bajo una lupa micrométrica mediante bisturies apropiados, confeccionados con pequeños trozos de hojas de afeitar, montados en el extremo de calisuares. Una vez separados los nudos y meristemas, se colocaron en tubos de ensayos de base plana que contenían 10 ml de un medio nutritivo de agar sólido, semejante al de Miller, C.O. 1961, con el agregado de la benciladenina (0,1-1-2 y 5 mg/l) y el ácido naftalenacético (0,1-1-2 y 5 mg/l).

Los tubos conteniendo los explantos, se mantuvieron en una cámara de crecimiento con la temperatura de 25 C 1 C y fotoperíodo de 16 horas; la iluminación fue de alrededor de 200 bujias pie. A los 10 días de iniciado el cultivo, los nudos cultivados con benciladenina (5 mg/l) emitieron entre 5 a 6 yemas por explanto; éstos repicados en el mismo medio con el agregado de 2 mg/1 de ácido naftalenacético formaron raíces.

En los cultivos con los meristemas, en la mayoría de los tratamientos hormonales formaron abundantes callos blancos y sólo hubo en algunos casos un escaso crecimiento de pequeñas yemas, cuando el medio de cultivo contenía 2 mg/l de benciladenina.

Estos resultados indicarían que se está frente a la presencia de un método rápido de micropropagación "in-vitro" de material seleccionado de Stevia rebaudiana Bertoni a partir de segmentos nodales.

BIBLIOGRAFÍA

  • CONCHA MARCAVILLACA, M. Efecto giberelínico de Steviosa sobre el crecimiento de porotos enanos (Magnific Famatina INTA). (No publicado). 1984.
  • ---- Acción giberelínica de Steviosa en el crecimiento de meristemas de paraíso gigante. (No publicado). = 1984.
  • GALPERIN de LEVY, R.H. Stevia rebaudiana Bertoni. Extracción, purificación y empleo del Steviósido. SAIPA, publicación Nc 4: 47-57. 1982.
  • KIRCHHEIM5R, M.J. Stevia rebaudiana Bertoni. Informe. Salta.1981.
  • HILLER, C.O. A Kinetín-like compound in maize. Hac. Acad. Sci.47: 170-174. 1961.
  • YAN, Y.W. and W.C. CHANG. In-vitro plant regeneration from leaf ex planta of Stevia rebaudiana Bertoni. Z. Pflanzenphysiol. 93: 337-343, 1979.
  • YAN-WEN YANG, YNE-IE HSING and WEI-CHIN CHANG. Clonal propagation of Stevia rebaudiana Bertoni, through axillary. Shoot proliferation "in-vitro". Bot. Bull. Academia Sínica 22: 57-62. 1981.


   
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