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Anales de SAIPA - Sociedad Argentina para la Investigación de Productos Aromáticos
IX CONGRESO NACIONAL DE RECURSOS NATURALES AROMÁTICOS Y MEDICINALES
Volumen XVI - 2000 - pág 131 a 134.

ACTIVIDAD ANTIHERPETICA "IN VITRO" EN EXTRACTOS DE 5 ESPECIES DE EUPATORIUM
CLAVIN María,* FERRARO Graciela,* COUSSIO Jorge *y MARTINO Virginia * GARCIA Gabriel ** y CAMPOS Rodolfo**

* *Cátedra de Farmacognosia, ÍQUIMEFA (Instituto de Química y Metabolismo del Fánnaco)UBA- CONICET.
** Cátedra de Virología
Facultad de Farmacia v Bioquímica, Universidad de Buenos Aires.Junín 956, (CP 1113) Buenos Aires - Argentina, Tel/fax: 4961-7637. e-mail: vmartino@.ffyb.uba.ar

RESUMEN

En el presente trabajo se reportan los resultados del screening de actividad antiviral de 20 extractos correspondientes a 5 especies medicinales del género Eupatorium: E. arnottianum Griseb., E. candolleanum H. et A., E. hecatanthum (DC.) Bak., E. laevigatum Lam. y E. macrocephalum Less.

Las infusiones de E. arnottianum y E. laevigatum presentaron actividad contra el herpes simplex tipo 1 (HSV-1).

SUMMARY

The results ofthe anti viral activity screening of 20 extracs from 5 medicinals spices of the Eupatorium genus: E. arnottianum Griseb., E. candolleanum H. et A., E. hecatanthum (DC.) Bak., E. laevigatum Lam. and E. macrocephalum Less. are reponed in this paper.

The infussions of E. arnottianum and E. laevigatum were active against herpes simplex typel (HSV-1).

INTRODUCCIÓN

En un screening previo de actividad antiherpétiea sobre 30 plantas medicinales argentinas, Eupatorium buniifolium presentó actividad promisoria. Este resultado motivó la ampliación del screening a otras especies del género.

Las especies seleccionadas a tal fin son las siguientes:

* E. arnottianum Griseb.
* E. candolleanum H. et A.
* E. hecatanthum (DC.) Bak
* E. laevigatum Lam
* E. macrocephalum Less.

Los nombres vulgares y usos se mencionan en Tabla 1.

Se conocen alrededor de 600 especies de Eupatorium que crecen en regiones cálidas y templadas. En Argentina crecen 80 especies, de las cuales 15 son medicinales. Se distribuyen en el Norte y Centro del país, siendo más abundantes en el Noreste.(1)

Las especies vegetales que se estudian en el presente trabajo son autóctonas de la Rep. Argentina y sus países limítrofes, y han sido utilizadas con fines medicinales por los indios Tobas, Araucano- Pampas (Argentina) y Lengua Maskoy (Paraguay).(2)

PARTE EXPERIMENTAL

- Material Vegetal: Fue recolectado en la Provincia de Entre Ríos, Argentina. Fue clasificado botánicamente y un ejemplar de herbario de cada especie se depositó en el Museo de Farmacobotánica Juan A. Domínguez, de la Universidad de Buenos Aires, Argentina.

- Preparación de los extractos: 3 gramos de material seco y molido se maceraron con sucesivas porciones de 50 mi. de diclorometano, durante 24 hs. cada vez, hasta extracción total (Extracto diclorometánico). El marco se llevó a sequedad y se extrajo con metanol, empleando la metodología descripta para el extracto diclorometánico (Extracto metanólico). Se prepararon además, extracto etanólico al 50%, siguiendo el mismo procedimiento, e infusión según Farmacopea Argentina V edición.

- Células y virus: Línea celular Vero, de la ABAC (Asociación Banco Argentino de Células). Virus Herpes simplex tipo 1 (HSV-1), del Instituto National de Virología C. Malbrán, Bs. As., Argentina.

- Determinación de toxicidad de los extractos: Se determinó la máxima concentración no citotóxica (MCNC). Monocapas de células Vero fueron incubadas en presencia de distintas concentraciones de extracto, resuspendido en medio de infección (MI) MEM- Eagle suplementado con suero fetal bovino al 2%. Luego de 72 hs. de incubación a 37 C, las monocapas celulares fueron observadas al microscopio óptico, determinando la máxima concentración del extracto que no produjo alteraciones morfológicas en las células de cultivo (MCNC).

- Ensayo de actividad antiviral: Se utilizó el ensayo de reducción de formación de placas virales. Monocapas de células Vero, cultivadas en placas plásticas de 24 pocilios, fueron infectadas utilizando diferentes cantidades de virus HSV-1 en presencia o ausencia (control) de la MCNC de cada extracto. Luego de 1 h. de adsorción a 37 C, a las monocapas infectadas se les agregó MI suplementado con metilcelusa al 0.5%, con o sin la correspondiente dilución de extracto. Luego de 48 hs. de incubación, las monocapas se fijaron con formol 10%, se colorearon con cristal violeta y se determinó el número de placas virales formadas (ufp). Para establecer el grado de actividad ejercido por el extracto, se calculó el porcentaje de disminución de la formación de placas virales en presencia de la MCNC respecto del control incubado en ausencia del extracto (% de inhibición). (3)

Se observó actividad antiviral ligeramente positiva en las infusiones de E. arnottianum (90% de inhibición) y E. laevigatum (86% de inhibición) y en el extracto etanólico al 50% de E. laevigatum (85% de inhibición). Todos los demás extractos con excepción de E. candolleanum diclorometánico presentaron bajo porcentaje de inhibición.

Se continúa con el fraccionamiento de los extractos activos, con la finalidad de purificarlos en diversas fracciones para verificar si aumenta la actividad antiviral específica en alguna de ellas y entonces aislar e identificar posteriormente los compuestos responsables de la actividad.

BIBLIOGRAFÍA
  1. Zardini E., Acta Farmacéutica Bonaerense 3(1): 77-81 (1984).
  2. Martínez Crovetto R., Estudios Etnobotánicos I, Bonplandia I (4): 313 (1964).
  3. García G. et al, Fitoterapia, Vol LXI N6 pag. 542 (1990).
  4. Marzocca A., Boletín de la Academia Nacional de Agricultura y VeterinariaN" 9, pag. 73(1993).
  5. Iharlegui, L. and Hurrel, J. Ecognicion 3 (1): 3-18 (1992).
  6. Filipov, A. Medicina] Plants of the Pilaga of Central Chaco. J. Ethnopharm 44: 181 -193( 1994)
  7. Vuoto, P. Entregas del Instituto Tilcara, Jujuy. 10: 12-76(1981).

Tabla 1 - Test de actividad antiherpética in vitro
ESPECIES BOTÁNICAS
NOMBRES VULGARES
(1)
USOS
(1), (4), (5), (6) y (7)
INFUSIÓN MCNC
% INHIBICIÓN
ETOH MCNC
% INHIBICIÓN
MEOH MCNC
% INHIBICIÓN
CH2Cl2 MCNC
%INHIBICIÓN

E. arnottianum

"uoué"

Contra dolores estomacales (5)

37 - 91

31 - 80

685 - 81

125 - 20

E. candolleanum

"tabaco del monte"

tintórea purgante (5)

37 - 47

31 - 38

1310 - 57

25 - 0

E. hecatanthum

"uoué"

Antidiarreica, antitusiva, contra afecciones intestinales (6), (7)

37 - 38

62 - 35

1450 - 61

25 - 26

E. laevigatum

"doctorcito"
"caá-hú"

Emenagoga, analgésica, purgante, tintórea (1), (4)

156 - 86

1000 - 85

2680 - 68

125 - 60

E. microcephalum

"illaka'ik"
"llankú kachú"

béquica, digestiva, abortiva (1), (4)

37 - 32

125 - 70

1835 - 39

62,5 - 40


MCNC: Máxima Concentración no citotóxica (microgramos de extracto seco / ml)

% INHIBICIÓN: Porcentaje de inhibición con respecto al control sin tratar =

100 - (producción viral (ufp) en presencia de extracto x 100) / producción viral (ufp) sin extracto


   
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