El presente trabajo se encuentra dirigido a proponer un método sencillo de control de calidad de las drogas vegetales que se comercializan en la herboristería argentina bajo el nombre de "nencia". Se realizaron perfiles cromatográfícos por cromatografía en capa delgada (TLC) de los extractos CH₂Cl₂ y MeOH de distintas muestras comerciales y se compararon contra muestras botánicamente identificadas de Gentianella achalensis, Gentianella florida y Gentianella riojae, de nombre vulgar "nencia", usando como referencia sustancias patrón químicamente identificadas (UV, H-NMR, C-NMR, MS), aisladas de G. achalensis. Los perfiles de las muestras comerciales son coincidentes con los de G. florida y G. achalensis. La identidad de los perfiles de estas dos últimas especies hace imprescindible una revisión de la identificación botánica realizada y de esta manera proponer los sistemas cromatográfícos desarrollados como parte de la certificación de calidad.

INTRODUCCIÓN

La identificación de las drogas vegetales que se utilizan con fines medicinales en la preparación de infusiones, tinturas y de otras formas farmacéuticas y que muchas veces son empleadas en la industria de la alimentación y/o licorera, es de fundamental importancia para mantener una misma calidad de producto y prevenir posibles adulteraciones y/o falsificaciones con el consiguiente riesgo de intoxicación.

Existen en nuestro país numerosas especies medicinales que se comercializan en herboristerías cuyo reconocimiento se encuentra limitado a su nombre vulgar y en muchos casos varias especies, aún de diferentes géneros, son conocidas por el mismo nombre.

Se comercializa bajo el nombre de "nencia" las partes aéreas con flor de una planta medicinal cuya identidad botánica hasta el momento es desconocida. Es usada en la medicina popular por sus propiedades amargas, digestivas y para trastornos hepáticos. Numerosas publicaciones científicas y de divulgación citan bajo el nombre de "nencia" a distintas especies de Gentianella de la familia Gentianaceae, y destacan su uso tradicional como amargo, estimulante del apetito, para problemas hepáticos y digestivos y febrífugo (1-5). Por otra parte, se han utilizado indistintamente diferentes especies de Centaurium y Gentianella en la elaboración de aperitivos en al industria licorera, por lo que su estudio merece particular atención.

La comercialización de esta o estas especies, bajo el nombre de "nencia" para consumo de la población crea, entonces, la necesidad de su correcta identificación botánica y de desarrollar métodos sencillos de análisis que permitan certificarla.

La familia Gentianaceae comprende 75 géneros y cerca de mil especies distribuidas ampliamente, la mayoría en regiones de clima frío y húmedo, El género de las Gentiana contiene una centena de especies, las que crecen en regiones montañosas del hemisferio boreal y en la Cordillera de los Andes. Algunas son medicinales y conocidas como tónicos amargos. La especie más conocida es sin duda la Gentiana lutea L., o genciana amarilla o genciana europea. La monografía de raíz de genciana figura en la mayoría de las farmacopeas del mundo. El nombre de "nencia", hace referencia probablemnte a "genciana", pues el principal uso de esta planta fue como sustituto de la genciana europea.

No existen hasta el momento investigaciones, fitoquímicas ni farmacológicas, sobre las especies de Gentianella que crecen en nuestro país. Los estudios realizados sobre otras especies de Gentianella y distintos géneros de la familia Gentianaceae como Gentiana, Swertia, Centaurium, Causeara, Chironia, distribuidos en otras partes del mundo, especialmente en la región de los Alpes y el Himalaya, mostraron tener un patrón común en cuanto a su composición química, caracterizándose por la presencia de secoiridoides a los que se les atribuye su sabor amargo y de xantonas las cuales adquirieron un gran valor quimiosistemático en toda la familia (6).

OBJETIVOS

El presente trabajo tiene como objetivo identificar cuál o cuáles especies de Gentianella son comercializadas como "nencia" en la herboristería argentina y establecer un perfil cromatográfico en capa delgada (TLC) que contribuya al control de calidad de dicha droga vegetal, materias primas empleadas en la elaboración de preparaciones farmacéuticas y en futuras monografías oficiales.

MATERIALES Y MÉTODOS

Material vegetal: Gentianella achalensis (Güg.) T.N. Ho & S.W. Liu, recolectada en La Pa/. (Córdoba) (Gl); G. florida (Griseb) Holub, recolectada en los alrededores de La Paz (Córdoba) (G2) y G. riojae Gilg.. recolectada en El Guanchín (La Rioja) (G3). Las especies fueron identificadas por el Prof. J.S. Pringle, Royal Botanical Ganden, Hamilton, Ontario, Canadá y la Prof. Marta Nájera y Etile Spegazzini de LAB RAM, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de La Plata, Argentina. Los ejemplares de herbario se encuentran depositados en el Museo de Botánica y Farmacognosia "Carlos Spegazzini" de la misma Institución. Seis muestras comerciales de "nencia" (S1-S6) fueron suministradas por distintos proveedores. Las muestras fueron molidas a polvo fino para facilitar su posterior extracción.

Testigos: Las xantonas metilbellidifolina (1,8-dihidroxi-3,5-dimetoxixantona), bellidifolina (1,5,8-trihidroxi-3-metoxixantona), isobellidifolina(l,3,8-trihidroxi-5-metoxixantona) y demetilbellidifolina (1,3,5,8-tetrahidroxixantona), mangiferina y 8-O-glucosildemetilbellidifolina y los secoiridoides genciopicrósido y swerósido fueron aislados de G. achalensis e identificados mediante UV, ¹HRMN, ¹³CRMN y espectrometría de masa.

Cromatografía en capa fina:

Muestras a analizar: El material vegetal comercial (S1-S6) fue extraído siguiendo la técnica de preparación de extractos.

Testigos: Img de los compuestos testigos fue disuelto en 1 ml. de metanol.

Extractos patrón: Fueron preparados siguiendo el método general de preparación de extractos, utilizando el material vegetal botánicamente identificado: G. achalensis (Gl), G. florida (G2) y G. riojae (G3).

Volumen de siembra: 5 µl de los extractos de las muestras a analizar (S1-S6) y extractos patrón (Gl-G3) y 2 µl de las soluciones de los testigos de xantonas fueron sembrados en bandas de 1 cm.

Sistemas cromatográficos:

SISTEMA I
Fase estacionaria: Cromatofolios de Silicagel Merck HF 254
Fase móvil: benceno: acetato de etilo (95:5)

SISTEMA II
Fase estacionaria: Cromatofolios de Silicagel Merck HF 254
Fase móvil: cloruro de metileno:metanol (95:5)

SISTEMA III
Fase estacionaria: Cromatofolios de Silicagel Merck HF 254
Fase móvil: acetato de etilo: metanol: agua (100:17:10)

SISTEMA IV
Fase estacionaria: Cromatofolios de Celulosa Merck
Fase móvil: ácido acético al 15% en agua.

Distancia de recorrido: 15 cm.

Revelado y observación de los cromatogramas: se visualizan a la luz natural, luz UV de 254 y 366 nm y luego de la pulverización con solución de SO₄H₂ al 50% en etanol, seguido del calentamiento a 105° C durante 5 min.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Los extractos cloruro de metileno y metanólico de seis muestras comerciales de nencia S1-S6 fueron cromatografiados en los sistemas I, II y III, IV respectivamente (ver Tabla 1) utilizando como patrón tres especies de Gentianella autóctonas, botánicamente certificadas, G1-G3 correspondientes a G. achalensis, G. florida y G. riojae respectivamente. Luego del revelado con distintos agentes de caracterización (ver Materiales y Métodos), los perfiles cromatográficos de los extractos cloruro de metileno y metanólico de las muestras comerciales S1-S6 mostraron ser idénticos a los perfiles correspondientes a los mismos extractos preparados con G. achalensis (Gl) y G. florida (G2), observándose en todos ellos las bandas correspondientes a las xantonas mangiferina (1), 8-O-glucosildemetilbellidifolina (4) demetilbellidifolina (5), bellidifolina (6), isobellidifolina (7) y metilbellidifolina (8) y a los secoiridoides genciopirósido (2) y swerósido (3) como compuestos principales.

Las xantonas demetilbellidifolina (5), bellidifolina (6) y metilbellidifolina (8) y el secoiridoide genciopicrósido (2) pudieron ser identificadas en la muestra G3 de "nencia" de La Rioja (G. riojae). La ausencia de mangiferina (1), 8-O-glucosildemetilbellidifolina (4), isobellidifolina (7), y del secoiridoide swerósido (3) en Gentianella riojae, así como la presencia de otras bandas no identificadas, permiten diferenciar claramente el perfil cromatográfico de G3 respecto de los perfiles de Gl y G2 y afirmar que las muestras comerciales analizadas no se corresponden con la "nencia" proveniente de La Rioja.

La similitud de los perfiles cromatográficos de Gentianella achalensis y G. florida justificaría posteriores estudios tendientes a reconfirmar la identidad de las especies autenticadas.

En base a los resultados obtenidos podemos proponer el análisis por cromatografía en capa delgada (TLC) como una herramienta útil en el control de calidad de las "nencias" comerciales y de las preparaciones que se realicen con G. achalensis.

AGRADECIMIENTOS

Agradecemos la gentil colaboración de los Dres. José Goin, Hugo Torres y Eduardo Uhrlandt en la recolección del material vegetal.

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