TRABAJOS CIENTIFICOS
Plantas medicinales, aromáticas y tintóreas.
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Anales de SAIPA - Sociedad Argentina para la Investigación de Productos Aromáticos
V JORNADAS NACIONALES DE ACTUALIZACIÓN SOBRE RECURSOS NATURALES AROMÁTICOS Y MEDICINALES - San Carlos de Bariloche (Río Negro), Argentina - 1991
Volumen XII - 1994 - pág 363 a 371.EXPOSICIÓN A EXTRACTOS DE Passiflora coerulae DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN DURANTE CORTO Y LARGO PLAZO.
Gladys Rodríguez, Silvia Flores, Pablo Pennachioni, Susana Zacchino *
Ana María Evangelista y Ricardo Duffard *** FARMACOGNOSIA; **LABORATOR1O DE TOXICOLOGIA EXPERIMENTAL; Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, Suipacha 531 (2000) Rosario.
RESUMEN
Extractos etanólicos de Passiflora coerulae fueron administrados a ratas Wistar (machos y hembras) de 3 meses de edad en dosis de 32 mg/kg/día repetitivas durante 15, 30 y 90 días.
Los animales fueron pesados diariamente y al finalizar los distintos tiempos de tratamiento se los sometió a dos pruebas comportamentales, la prueba del campo abierto y la del rolo en movimiento. Se pesaron los órganos vitales y se observaron sus cambios morfológicos.
Los resultados mostraron que las ratas hembras pero no los machos aumentaron de peso significativamente con respecto a los controles después de 3 meses de tratamiento.
Sin embargo, los extractos no causaron ningún cambio en las relaciones cerebro/peso corporal e hígado/peso corporal.
Una diferencia estadísticamente significativa se observó en la prueba del rolo en movimiento donde las hembras mostraron un déficit en el equilibrio ya a los 30 días de exposición al extracto mientras que los machos lo hicieron a los 90 días.
Además las hembras pero no los machos mostraron alteraciones significativas en la prueba de campo abierto después de 90 días de tratamiento.
Tomados en conjunto, los resultados indican que el uso repetitivo de P. coerulae podría constituir un riesgo para la población, lo que requiere de posteriores investigaciones.
ABSTRACT
Ethanolic extracts of Passiflora coerulae were administered to Wistar rats (male and female) aged 3 months at a dose of 32 mg/kg/day, during 15, 30 and 90 consecutive days.
The animals were weighed daily and at the end of the various treatment periods two behavioral tests were carried out: an Open Field Test and a Rotarod Test.
Vital organ weights were recorded and observed for morphological changes. The results showed that female but not male rats, gained weight at much more rate than controls after three months of treatment.
Nevertheless, the extracts didn't cause any change in the relations brain/body weight and liver/body weight.
A statistical significant difference in behaviour between males and females was observed in the Rotarod Test performance where female showed an equilibrium deficit after 30 days, and males, after 90 days of treatment with reference to controls.
Females but not males showed significant alterations in the Open Field Test after 90 days of treatment.
Taken together, the results indicated that P. coerulae extracts may be not safe for repetitive human use and deserve further investigations.
INTRODUCCIÓN
Las especies del género Passiflora cubren un alto espectro de propiedades farmacológicas (1,2). La especie que se encuentra en el litoral argentino es la P. coerulae, que ha sido empleada tradicionalmente para combatir ciertos estados de tensión nerviosa y ansiedad.
El extracto total de esta especie, administrado oral e intraperitonealmente a ratas, demostró aumentar el tiempo de sueño y proteger a los animales de los efectos convulsivantes del pentilentetrazole.(4)
Desde el punto de vista químico, se ha reportado en la literatura el aislamiento de alcaloides -carbonílicos (1, 2, 3) y de flavonoides (5,13) en las especies del género Passiflora, Paladini y col. (14) aislaron un flavonoide, la crisina, que actuaba como ligando de receptores benzodiazepínicos.
Speroni y col. (4), demostraron que el alcaloide -carbonílico harmano, no era el responsable del efecto sedativo observado.
Con respecto a los efectos tóxicos, Domínguez (15) reporta que altas dosis de P. coerulae producen convulsiones, vómitos y otros efectos indeseables aunque no precisa en qué animales se han observado estos efectos. Roudina y col. (16), sin embargo, demostraron que una alta dosis única de un extracto de P. coerulae administrada por vía oral y parenteral a ratones, no producía efectos tóxicos visibles. París y col. (17) lo consideran un medicamento no tóxico, mientras que de Robertis y col. (18) sugirieron que no se debería descartar alguna influencia sobre las funciones cerebrales.
Sin embargo nada se ha reportado hasta el momento sobre el efecto tóxico o indeseable que produce una exposición repetitiva de animales de laboratorio, a dosis regulares de extracto de P. coerulae. En este trabajo, nosotros expusimos ratas Wistar de 3 meses de edad, machos y hembras, al consumo repetitivo de extractos totales de Passiflora coerulae, durante 30, 60 y 90 días, al cabo de los cuales se les realizaron pruebas comportamentales para evaluar si se producían cambios en el comportamiento, con respecto de los controles, que pudieran constituir un riesgo para el consumo humano.
MATERIALES Y MÉTODOS
MATERIAL VEGETAL
Hojas y flores de Passiflora coerulae fueron adquiridas en herboristerías de la zona e identificadas por la cátedra de Botánica de la Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas (UNR) quedando una muestra depositada en el herbario de la misma.
PREPARACIÓN DE LOS EXTRACTOS
Las hojas y flores pulverizadas (1 kg) de Passiflora coerulae, se extrajeron en un Soxhlet sucesivamente con hexano y con etanol. El extracto etanólico fue concentrado al vacío para dar un residuo semisólido (76.27 g) el que fue redisuelto en agua hirviendo en la proporción que se indica más abajo constituyendo el agua de bebida para los animales.
ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
- Se utilizaron ratas blancas, origen Wistar, machos y hembras de 90 días de edad obtenidos el bioterio de la Cátedra de Fisiología de la Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Se mantuvieron en una habitación aislada a dos por jaula. Se controló la temperatura ambiental a 21° C bajo ritmo cirkadiano de luz-oscuridad de 8 a 19 hs., cambiándoles la cama cada 48 hs.
- Se alimentaron a los animales diariamente con alimento balanceado para animales Nutric (Córdoba C y T). A los que fueron seleccionados al azar para el tratamiento, se les dio por vía oral, como bebida, la solución acuosa del extracto de Passiflora, previamente descripto equivalente al consumo diario de un adulto humano: 30 g/día de partes aéreas (= 32 mg/kg/día de extracto).
Los animales controles recibieron agua corriente como bebida. Cada grupo de experimentación constó como mínimo de 12 animales. Durante cada uno de los tiempos programados se pesaron diariamente a los animales y se les controló el consumo de líquido y comida.
Al final de los distintos tratamientos se realizaron las siguientes pruebas comportamentales (19):
Prueba de campo abierto.
Prueba en un rolo en movimiento.
Ambas fueron llevadas a cabo en una sala suavemente iluminada, aislada de ruidos extraños y mantenida a una temperatura de 20-24°C, Los animales fueron observados por temblores, debilidad u/otros signos de la enfermedad que pudiera tener durante el tratamiento.
Una vez realizados los resultados obtenidos con el extracto total, se realizó lo mismo con el extracto alcaloídico y con cada uno de los otros extractos.
Prueba de campo abierto: El campo abierto es una caja de madera de1.20 x 1.20 x 0.30 metros, con un piso dividido en cuarenta cuadrados de 0,30 metros con cinta negra. Allí se midió la actividad espontánea expresada como ambulación que se definió como el número de veces en que cada animal cruzó de un cuadrado al otro entrando por lo menos las dos patas frontales. Se observó también el número de veces que el animal dedicaba a asearse y que levantaba las patas delanteras.
También se controló la defecación en el período de 10 minutos que duró la prueba, ya que el número de bolos fecales emitidos en este período da idea de la emocionalidad del animal.
Prueba del rolo en movimiento: El rolo es un aparato semejante al descripto por Duham y Muja (20), (1956). Tiene un eje rotatorio de hierro de 5 cm de diámetro dividido en tres secciones iguales por discos circulares de 30 cm de diámetro. La velocidad de movimiento de este eje fue de 8 revoluciones por minuto. La altura del eje, a 50 cm de la mesada es para desalentar al animal a saltar.
Un déficit en el equilibrio del animal fue indicado por una incapacidad para mantenerse en el rolo por el período de dos minutos que duró la prueba.
Inmediatamente después de las sesiones de comportamiento correspondientes a cada trabajo de exposición, se sacrificaron los animales en una guillotina. Se extrajeron sus cerebros e hígados y se registraron inmediatamente sus pesos húmedos.
Se observó a cada uno de los órganos para ver si presentaban algún tipo de anormalidades.
ESTADÍSTICAS
Las diferencias estadísticas fueron evaluadas por el test Mann-Whitney-U para muestras independientes y el nivel de significación fue p < 0,05 (19).
RESULTADOS
Un total de 72 ratas machos y 72 hembras fueron asignadas al azar a los grupos de control y tratados en grupos A, B y C de acuerdo con los tiempos de exposición al extracto (tabla 1).
TABLA I
15 días de tratamiento
Grupo A30 días de tratamiento
Grupo B90 días de tratamiento
Grupo CNúmero de animales
Tratamiento
Control
Tratamiento
Control
Tratamiento
Control
0
12
12
12
12
12
12
0
12
12
12
12
12
12
La dosis de extracto seleccionada para los animales tratados fue equivalente al consumo diario de un adulto humano.
Los animales controles recibieron agua corriente como bebida.
EFECTOS DEL EXTRACTO TOTAL DE Passiflora coerulae EN EL PESO CORPORAL Y EN EL LIQUIDO INGERIDO
Se encontró un aumento estadísticamente significativo (p < 0,01) en el peso de las hembras a los 90 días de tratamiento. El aumento observado en los machos no fue significativo (Fig. 1).
Con respecto al líquido ingerido no se observó modificación en cuanto a cantidad entre los animales tratados y los controles machos y hembras.
RELACIÓN ÓRGANO / PESO CORPORAL
La relación cerebro/peso corporal e hígado/peso corporal no se vio modificada en ningún tiempo de exposición a la droga (Tabla II).
Tampoco presentaron alteraciones morfológicas macroscópicas los órganos de los animales tratados con respecto a los controles.
TABLA II*.
15 días de tratamiento
Grupo A30 días de tratamiento
Grupo B90 días de tratamiento
Grupo CHígado Peso
Cerebro Peso
Hígado Peso
Cerebro Peso
Hígado Peso
Cerebro Peso
0 Control
0.03939
0.00478
0.03424
0.00396
0.03597
0.00381
0 Tratamiento
0.03610
0.00486
0.03720
0.00460
0.03295
0.00381
0 Control
0.03245
0.00707
0.03402
0.00646
0.03420
0.00618
0 Tratamiento
0.03552
0.00738
0.03283
0.00674
0.03419
0.00711
CAMPO ABIERTO
El comportamiento de aseo indica una modificación significativa en las hembras a los 90 días y no en los machos igual que en los cruces.
En los demás comportamientos como defecación y alzadas, si bien se nota una diferencia, esta no resulta significativa (Fig. 2, 3, 4 y 5).
ROLO EN MOVIMIENTO
Se observa una alteración del equilibrio tanto en machos (p < 0.05) como en hembras (p < 0.01), evidenciándose este efecto más tempranamente en las hembras.
En estas últimas se observa ya a los 30 días (p < 0.05) (Fig. 6).
CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos claramente demuestran, que una exposición repetitiva a extractos de Passiflora coerulae, de corto (15-30 días) y largo plazo (90 días) en dosis equivalentes a las tomadas diariamente por el ser humano, induce alteraciones del equilibrio en ratas Wistar, tanto en machos como en hembras evidenciándose este efecto más tempranamente en las hembras.
En la actividad en el campo abierto se observa modificación en las hembras a los 90 días y no en los machos.
También se observa un aumento significativo en el peso corporal en las hembras mientras que la cantidad de líquido ingerido, las relaciones cerebro/peso corporal e hígado/peso corporal y la morfología de los órganos vitales, no se vieron modificadas en ningún tiempo de exposición a la droga.
Una explicación razonable para este comportamiento sería que los productos activos de detoxificación se metabolicen vía el sistema enzimático P450. Como las hembras tienen menor concentración de este sistema, los efectos adversos del compuesto se visualizarán antes que en los machos.
Estos efectos observados en las ratas podrían producirse también en los humanos y así esta planta considerada no tóxica estaría generando en la población un riesgo innecesario.
El fraccionamiento del extracto etanólico total con solventes de distinta polaridad, variaciones de pH y cromatografías, permitirá obtener subextractos, los cuales podrán ser ensayados de la misma forma que el extracto total.
NOTA DE HERBOTECNIA: Lamentablemente las figuras no fueron publicadas y por tal razón no se incluyen aquí.
BIBLIOGRAFÍA
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